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ELISA樣本稀釋操作指南：原理、方法與優(yōu)化技巧
ELISA樣本稀釋操作指南
一、稀釋原理
ELISA樣本稀釋的核心是通過精確的濃度梯度調整，使待測樣本的OD值落在標準曲線線性范圍內(nèi)(通常為最高標準品OD值的50%-80%)?。稀釋不足會導致信號飽和，過度稀釋則可能降低檢測靈敏度?。關鍵是通過預實驗確定樣本基質效應，選擇適當?shù)南♂屢?如1×PBS或專用稀釋緩沖液)以保持抗原-抗體結合活性?。
二、標準操作方法
標準品稀釋?
采用倍比稀釋法：原液按1:2、1:4等比例逐級稀釋，推薦濃度梯度覆蓋檢測范圍(如1000 pg/mL至15.6 pg/mL)?。
使用校準移液器，每步混勻后取150-300μL轉移至下一管，避免氣泡殘留?。
樣本稀釋?
血清/血漿樣本需用稀釋緩沖液至少稀釋2倍，細胞上清建議1:1稀釋?。
高濃度樣本需預實驗確定最佳稀釋倍數(shù)，確保OD值接近標準曲線中段?。
三、優(yōu)化技巧
稀釋液選擇?：含0.05% Tween-20的PBS可減少非特異性結合，脫脂牛奶(5%)適合封閉高背景樣本?。
避免誤差?：使用帶濾芯槍頭防止交叉污染，手工洗板時拍干孔內(nèi)液體?。
質控驗證?：每板需含空白孔和陰性對照，標準曲線R2值需>0.99?。
四、常見問題處理
假陽性/陰性?：檢查樣本是否溶血或脂血，避免反復凍融?。
信號異常?：確認酶標試劑現(xiàn)配現(xiàn)用，顯色時間控制在15-30分鐘?。
通過規(guī)范操作和優(yōu)化策略，可顯著提升ELISA檢測的準確性和重復性?。
注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。 Elisa試劑盒
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