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以下是ELISA試劑盒實驗中常見問題及解決方案的總結(jié)，天津本生技術(shù)小編結(jié)合實驗操作關(guān)鍵環(huán)節(jié)進行分類說明：
一、?樣本處理問題?
溶血/脂血干擾?
現(xiàn)象?：背景值升高或結(jié)果異常。
解決?：血液樣本需靜置1-2小時后離心(3000×g，15分鐘)，避免劇烈震蕩;脂血樣本建議超速離心或過濾。
反復凍融影響?
現(xiàn)象?：靶蛋白降解導致信號減弱。
解決?：樣本分裝保存(-20℃或-70℃)，凍融≤3次。
二、?加樣與孵育問題?
加樣誤差?
現(xiàn)象?：復孔差異大(CV>15%)。
解決?：使用校準后的移液器，垂直加樣避免氣泡;高濃度樣本優(yōu)先稀釋。
孵育不充分?
現(xiàn)象?：信號弱或無信號。
解決?：確保37℃孵育時間準確(誤差±5分鐘)，微孔板加蓋防蒸發(fā)。
三、?洗滌問題?
洗板不凈?
現(xiàn)象?：高背景或非特異性結(jié)合。
解決?：手工洗板需注滿每孔，靜置1分鐘后甩干;自動洗板機需定期維護噴頭。
洗滌液殘留?
現(xiàn)象?：孔底液體影響OD值。
解決?：甩板后倒扣于吸水紙上輕拍。
四、?顯色與檢測問題?
顯色異常?
現(xiàn)象?：顯色過快(底物污染)或過慢(酶失活)。
解決?：TMB避光保存，現(xiàn)配現(xiàn)用;終止后10分鐘內(nèi)讀數(shù)。
標準曲線不佳?
現(xiàn)象?：R2<0.95或線性差。
解決?：標準品復溶后渦旋混勻，避免凍干粉殘留;建議雙對數(shù)擬合曲線。
五、?其他高頻問題?
“白板"現(xiàn)象?
原因?：酶標抗體失效或漏加。
解決?：檢查試劑有效期，按順序添加酶標抗體。
邊緣效應?
原因?：溫育溫度不均。
解決?：孵育時避免疊放板條，確保熱空氣流通。
六、?預防性措施?
試劑管理?：未使用板條需密封保存(含干燥劑)，避免受潮。
質(zhì)控設置?：每板需包含陰/陽性對照和空白孔。
設備校準?：定期校驗酶標儀波長(如450nm±2nm)和移液器精度。
注：若問題持續(xù)，建議聯(lián)系試劑盒廠家提供標準操作視頻或技術(shù)支持。
注：以上資料僅供參考，具體詳情來咨詢技術(shù) 老師或品牌供應商。
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